HIV检测方法艾滋病常识之二
对于HIV的检测，有多种方法，适合于不同的检测目的，比如自检，筛查，排除，确证，病程监测，耐药性监测等，我们进行逐一详细介绍。
HIV检测流程图
HIV检测分为抗体检测和抗原检测
抗体检测HIV抗体检测一般分为初筛检测和初筛确证
1抗体检测初筛检测
样本采集
血液
血清
用不含抗凝剂的真空采血管抽取5～10ml静脉血，或一次性注射器抽取静脉血，转移至无抗凝剂的试管中，室温下自然放置1～2小时，待血液凝固、血块收缩后再用～r/min离心15分钟，吸出血清，置于合适的容器中，备用。
血浆
将采集的抗凝全血～r/min离心15分钟，上层即为血浆，吸出置于合适的容器中，备用。
全血
末梢全血：消毒局部皮肤（成人和1岁以上儿童可选择耳垂、中指、无名指或食指。1岁以下儿童采用足跟部）。用采血针刺破皮肤，用无菌纱布擦掉第一滴血
抗凝全血：消毒局部皮肤，用加有抗凝剂的真空采血管抽取适量静脉血，或用一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管中，轻轻颠倒混匀6～8次，备用。
滤纸干血斑
可将采集的各种血液样品制备成滤纸干血斑，用于检测。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血浆制备滤纸干血斑
口腔黏膜渗出液
使用试剂盒提供的容器收集样品
尿液
使用专用采尿管
初筛检测方法
1
酶联免疫吸附试验（ELISA）
这类试验可使用血液（包含血清、血浆和滤纸干血斑）、尿液样品，ELISA多为HIV抗体检测试剂。HIV抗原抗体联合检测试剂可同时检测血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗体
2
化学发光或免疫荧光试验（CIA/IFA）
这类试验采用发光或荧光底物，可使用血液(包含血清和血浆)、尿液样品，既可检测抗体，也可联合检测抗原抗体。HIV抗原/抗体包被于固相载体，加入待检样品和酶或荧光标记的HIV抗原/抗体，加发光或荧光底物，用发光或荧光仪测定结果。有效试验的阴性和阳性对照必须符合试剂盒规定。
3
快速检测（RT）及其他试验
1明胶颗粒凝集试验（PA）
是HIV抗体检测的一种简便方法。当待检样品含有HIV抗体时，明胶颗粒与抗体发生凝集反应，根据凝集情况判读结果。PA试剂有两种:同时检测HIV-1和HIV-2抗体以及分别检测HIV-1和HIV-2抗体
2
免疫渗滤试验
斑点ELISA和斑点免疫胶体金（或胶体硒）快速试验：
以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原点状或线状固定在膜上，加待检样品，使抗原抗体反应。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点或条带。
反应时间在10分钟以内。
3
免疫层析试验
以硝酸纤维膜为载体，HIV抗原线状固定在膜上，待检样品沿着固相载体迁移，阳性结果在膜上抗原部位显示出有色条带。有效试验的质控带必须显色。
这类试验可使用血液、口腔黏膜渗出液，操作简便快速，适用于应急检测、门诊急诊检测、VCT及检测点等。一般可在10～30分钟内得出结果。
窗口期：艾滋病毒进入人体后，需要经过一段时间血液才会产生艾滋病毒抗体，在此期间抗体检测呈阴性，这段时间即为窗口期。感染者体内的HIV数量会在这时达到一个峰值，传染性极强。急性感染期也出现在这段时间。多数人在感染艾滋病毒后有3至12周“窗口期”，在此期间，人体仍在产生艾滋病毒抗体，但这些抗体尚无法测出。这一最初感染期感染性最强，但在各感染期都可能会传播艾滋病毒。3个月后，即在感染者体内有足够时间产生抗体后，应进行复检，以证实初检结果
2
抗体检测初筛确证
确证试验方法
1
免疫印迹试验（WB）
WB可使用血清、血浆和滤纸干血斑。WB采用间接法检测样品中的抗HIV-1/HIV-2特异性抗体。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分离开来，然后再把这些分离的不同蛋白带转移到硝酸纤维素膜上（或PVDF膜）。将此膜切割成条状，每一膜条上均含有经电泳分离过的HIV抗原。待测样品经适当稀释后，加至硝酸纤维素膜上，恒温震荡，使其充分接触反应，血清中若含有HIV抗体，就会与膜条上抗原带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，根据出现条带情况,按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴性或不确定。
2
条带/线性免疫试验（RIBA/LIA)）RIBA/LIA采用间接法检测样品中的抗HIV-1/HIV-2特异性抗体。试剂盒的膜条上包被有HIV-1/HIV-2不同的重组抗原片段，加入待测样品后，其中的相应抗体与抗原发生特异性的免疫反应；随后加入抗人IgG（碱性磷酸酶标记）与HIV特异性IgG抗体相结合；加入显色底物后，在碱性磷酸酶的催化下，特异性抗体的结合部位出现肉眼可见的条带,按照试剂盒说明书判定标准，判断待测样品为阳性、阴性或不确定。
3
其他方法
可用于确证的特定条件下的三种酶联免疫、三种快速试验或酶联加快速试验，免疫层析和免疫渗滤试验
抗原检测
抗原检测的意义1HIV-1感染窗口期、HIV-1抗体不确定，或HIV-1阳性母亲所生婴儿的鉴别诊断
2
第四代HIV检测试剂（抗原抗体检测试剂）的阳性结果的辅助诊断
3
HIV-1分离培养、病毒复制状况的监测
样本采集血清、血浆、全血或病毒培养上清液
检测方法一般常用的分为：
酶联免疫吸附实验（ELISA法）：最常用
核酸检测：最权威
酶联荧光分析法（ELFA）、电化学发光法（ECLIA）、抗原抗体快速检测法
核酸检测
血浆、血清、组织器官或血液制品等可用于检测HIV-1RNA和DNA。
全球目前正式用于临床诊断HIV-1急性期感染的核酸检测试剂比较少，主要是美国FDA批准的Gen-Probe公司生产的AptimaHIV-1RNA核酸定性检测试剂和欧盟批准的AbbottMHIV-1RNA/DNA定性检测试剂。
前者检测原理为转录介导等温扩增（TMA）和化学发光标记探针杂交检测，检测靶基因为HIV-1LTR和多聚酶基因；后者检测原理为Taqman实时荧光PCR扩增检测，检测靶基因为多聚酶区整合酶基因。
国内生产的用于血浆及其血液制品筛查的核酸检测试剂主要为Taqman实时荧光PCR检测试剂。
试剂必须是经国家食品药品监督管理总局注册批准、在有效期内的试剂。严格按说明书操作。目前国内外没有商品化的HIV-2核酸检测试剂。
核酸检测的意义
1HIV-1感染诊断
婴儿感染早期诊断、HIV-1感染补充试验及急性期和晚期感染者的诊断
2
治疗效果监测
艾滋病病人经抗病毒药物治疗后，定期进行HIV-1核酸定量检测，可判断抗病毒药物治疗的治疗效果。病毒载量结果动态分析，对决定是否继续使用原定的治疗方案以及是否需要更改治疗方案起到重要作用
3
病程监控及预测
HIV感染者体内病毒载量的变化具有一定规律，这种变化与疾病的进程密切相关
4
耐药性监测
可用于HIV耐药检测和监测，指导公共卫生医生了解耐药性病毒株流行的态势和指导临床医生判断病人的抗病毒药物治疗效果和修改抗病毒药物治疗方案
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